Curso Online de Diagnóstico Molecular

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Diagnóstico Molecular

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Diagnóstico Molecular

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  • Diagnóstico

    Molecular

  • Polymerase Chain Reaction - PCR
    Reação em cadeia da polimerase

  • Importantes Aplicações da PCR:

    Arqueologia
    Medicina Forence
    Genética
    Pesquisa Biológica
    Diagnóstico Clínico

  • TÉCNICAS DA PCR EMPREGADAS AO DIAGNÓSTICO MOLECULAR

    TÉCNICAS DA PCR EMPREGADAS AO DIAGNÓSTICO MOLECULAR

    PCR Convencional

    PCR - RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)

    PCR em Tempo Real

    Multiplex PCR

    Seqüenciamento DNA bacteriano

  • 1984 - PCR foi apresentada pela primeira vez em um encontro científico

    Publicação:
    Mullis K. – desenvolveu a tecnologia “Prêmio NOBEL” de Química em 1993
    Saiki R. et al. 1985

    1984 - PCR foi apresentada pela primeira vez em um encontro científico

    1976: Thomas D. Brock descobriu a DNA polimerase termoestável de Thermus aquaticus.
    1985: Esta DNA polimerase foi usada por Saiki para realizar a PCR.

    Saiki et al., 1985. Science 230: 1350- 1354

  • Thomas D. Brock no lago do “Yellowstone National Park”
    de onde foi isolado da bactériaThermus aquaticus

    750C

  • cytosine

    Estrutura e Duplicação do DNA

  • O DNA sempre tem duas fitas de ácidos nucléicos em hélice
    As duas fitas de ácidos nucléicos se mantêm juntas por PONTES DE HIDROGÊNIO
    Para que o pareamento ocorra, a duas fitas têm que ser antiparalelas
    O pareamento G-C tem 3 pontes de hidrogênio
    O pareamento A-T tem 2 pontes de hidrogênio

    Estrutura e Duplicação do DNA

  • As duas fitas da dupla hélice podem ser reversivelmente separadas quando as pontes de hidrogênio são rompidas.

    Aumento de temperatura ou Extremos de pH.

    Estrutura e Duplicação do DNA

  • PCR:

    PCR:

    Convencional

    PCR - RFLP (restriction fragment length polymorphism)

    Tempo Real

    Multiplex

    Seqüenciamento DNA bacteriano

  • PCR requer 7 componentes essenciais

    Template de DNA

    Tampão para manter o pH

    Cátions monovalentes, usualmente K+ (KCl)

    Cátion divalente, usualmente Mg2+

    Um par de oligonucleotídeos para iniciar a síntese de DNA

    Deoxinucleotídeos trifosfato (dNTPs)

    DNA polimerase termoestável

    PCR requer 7 componentes essenciais


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  • TÉCNICAS DA PCR EMPREGADAS AO DIAGNÓSTICO MOLECULAR
  • 1984 - PCR foi apresentada pela primeira vez em um encontro científico
  • PCR:
  • PCR requer 7 componentes essenciais
  • Componentes necessários à reação de PCR
  • PCR – Metodologia
  • Papilomavírus Humano
  • Análise do polimorfismo de fragmentos de restrição
  • PCR:
  • PCR em Tempo Real (Real-Time)
  • Amplificação em tempo real – RT-PCR
  • Conseqüências da antibiótico terapia empírica inadequada
  • Biologia molecular como auxílio na conduta terapêutica
  • Multiplex RT-PCR - Detecção
  • PCR multiplex
  • PCR e seqüenciamento:
  • Princípio do SEQÜENCIAMENTO
  • Seqüenciamento de DNA
  • Seqüenciamento de DNA 4 capilares
  • Método Automatizado
  • Seqüenciamento
  • Gene 16S rRNA:
  • Testes comerciais aprovados nos EUA para diagnóstico molecular de doenças infecciosas: